Неинвазивная пренатальная диа­гностика на ранних сроках бе­ременности: определение резус-принадлежности плода

ФГУ «Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. В. И. Кулакова» Москва, Россия

Неинвазивное определение резус-принадлежности плода у резус-отрицательных беременных женщин позволит снизить затраты на ведение беременности, избежать многократ­ное определение резус-антител, не проводить профилактику резус-иммунизации. У резус-сенсибилизированных женщин применение этой технологии позволяет на ранних геста-ционных сроках оценить риск развития резус-конфликта, своевременно начать проведение лечебно - профилактических мероприятий, а в случае резус отрицательной принадлежности крови плода избежать инвазивных процедур и оптимизировать ведение беременности.

Цель проведенного исследования явилось определение возможности неинвазивной диагностики резус-фактора плода у резус-отрицательных беременных женщин в сроках от 13 до 20 недель.

Материалом для исследования служила плазма периферической крови 74 беременных с резус-отрицательной кровью в сроках гестации от 13 до 20 недель.

В исследование вошли первобеременные женщины с отсутствием резус-иммунизации (51,4%), повторнобеременные женщины без резус-иммунизации (35,1%) и сенсибилизиро­ванные женщины с рождением ребенка с гемо­литической болезнью различной степени выра­женности (13,5%).

Определение RhD гена проводили с помо­щью метода ПЦР в реальном времени. Для оценки специфичности определения резус-принадлежности крови методом ПЦР были исследованы 75 образцов донорской крови, резус-принадлежность которых была установ­лена предварительно иммунологическим мето­дом с использованием гелевых планшет DG Gel ABO/Rh (2D) (GRIFOLS, Испания).

Был определен порог чувствительности выяв­ления ДНК гена RhD. Установлено, что мини­мальное количество ДНК, которое давало поло­жительный результат на ген RhD, составило 9 пикограмм ДНК или 2.4 генома в реакционной пробирке, что соответствует 108 пикограмм ДНК или 33.8 генома на 1 мл крови. Для оценки спец­ифичности определения резус-принадлежности крови методом ПЦР были исследованы 75 образ­цов донорской крови, резус-принадлежность которых была установлена предварительно иммунологическим методом. Все 43 резус-положительные образцы крови показали поло­жительный результат и при исследовании мето­дом ПЦР. Из 32 образцов резус-отрицательной крови методом ПЦР в 31 случае также был получен резус-отрицательный результат, а в 1 - резус-положительный, что соответствует специ­фичности по отрицательным пробам 98.9%. Из 74 проб крови резус-отрицательных беремен­ных, в 43 пробах кровь плода была определена как резус-положительная и во всех случаях этот результат подтвердился после обследования крови новорожденного в иммунологическом тесте с использованием гелевых планшет DG Gel ABO/Rh (специфичность 100%).

В 31 случае методом ПЦР кровь плодов была определена как резус-отрицательная и после родов у 30 новорожденных этот результат под­твердился при обследовании крови иммуноло­гическим методом (чувствительность - 96.8%). В одном случае у новорожденного при имму­нологическом исследовании кровь оказалась резус-отрицательная. При повторном исследова­нии крови этого новорожденного методом ПЦР вновь был получен положительный результат на наличие ДНК гена RhD. По-видимому, в данном случае мы имеем дело с так называемым "сла­бым" резус-геном, который, по данным литера­туры, встречается среди резус-отрицательных женщин в европейской и российской популя­циях с частотой 4-5 %.

Таким образом, предложенная технология позволяет неинвазивным способом с высокой чувствительностью и специфичностью устанав­ливать резус-принадлежность плода, исполь­зуя для исследования плазму периферической крови резус-отрицательной женщины в сроках гестации более 13 недель.