Определение метилирования генов-супрессоров опухолевого роста при фоновых и диспласти-ческих процессах шейки матки

Кафедра акушерства и гинекологии ФППОВ Московская медицинская академия им. М. А.Сеченова Москва, Россия

Исследование молекулярно-биологических причин возникновения рака шейки матки пред­ставляет одну из наиболее актуальных проблем современности. Важная роль в процессе канцеро­генеза отводится метилированию Ср-G остров­ков в промоторных районах генов. Изменение профиля метилирования генов-супрессоров является характерной чертой опухолевых клеток, причем аномальное метилирование наблюдается уже на ранних стадиях канцерогенеза.

Цель - изучение прогностической значимо­сти метилирования генов-супрессоров в разви­тии неопластических процессов шейки матки.

В исследование включены 121 пациентка репродуктивного возраста с морфологически верифицированным диагнозом. Критерием исключения являлось наличие сопутствую­щих опухолей и опухолевидных процес­сов. Биопсийный материал был взят в ОАО «Лечебный Центр» и разделен на визуально нормальную ткань шейки матки и патологиче­ски измененную. Гистологическое исследова­ние было проведено в ММА им. И. М.Сеченова. Генетические исследования - в НИИ моле­кулярной медицины при ГОУ ВПО ММА им. И. М.Сеченова. Геномную ДНК выделяли мето­дом фенолхлороформной экстракции. Для определения метилирования Ср-G островков промоторных областей исследуемых генов при­меняли метод метил-чувствительной ПЦР.

Было изучено метилирование генов RASSF1, MLH1, GSTP1, RAR-b при фоновых и диспла-стических процессах шейки матки. При фоно­вых процессах максимальный уровень метили­рования (2%) определен для гена GSTP1, что согласуется с данными других исследователей о частой инактивации этого гена путем мети­лирования уже на стадии фоновых процессов. Метилирование генов MLH1 и RAR-b выявлено в 1% случаев. Ни в одном случае не обнаружено аномального метилирования гена RASSF1, что позволяет сделать заключение о том, что гипер­метилирование этого гена не характерно для фоновых процессов шейки матки.

При CIN I выявлено метилирование гена RASSF1 в 7%, генов MLH1 и GSTP1 в 3%, RAR-b в 1% случаев.

При CIN II максимальное метилирование определено для генов RAR-b (54%) и RASSF1 (45%), что коррелирует с литературными дан­ными, свидетельствующими об обнаружении данных генов в предраковых новообразованиях и увеличении частоты метилирования в связи с прогрессией заболевания. Метилирование

MLH1 и GSTP1 в 32%.

При CIN III высокий уровень метилирова­ния определен для генов RASSF1 (68%), RAR-b

(58%), MLH1 и GSTP1 (47%), который досто­верно отличается от метилирования при фоно­вых процессах шейки матки.

Таким образом, учитывая высокий уровень частоты метилирования генов-супрессоров

RASSF1, RAR-b, MLH1, GSTP1 в дисплазиях

Шейки матки и статистически достоверные раз­личия их с фоновыми изменениями, данные гены могут рассматриваться как потенциальные биомаркеры для ранней диагностики диспла-стических поражений и выявления больных с повышенным риском малигнизации.