Определение тропизма вируса к корецепторам

Поскольку блокаторы CCR5 корецепторов эффективны только в случае преобладания в орга­низме пациента R5-тропных вирусов и смена тропизма к корецептору происходит в неопреде­ленный момент, необходимо определять тропизм вируса к корецептору до начала лечения этими препаратами. Определение тропизма вируса до начала лечения позволяет избежать ненужных затрат и дополнительных рисков для пациента. Для определения тропизма ВИЧ методом Фенотипирования Разработано несколько тест-систем, в том числе Trofile® (Monogram Biosciences), Phenoscript® (VIRalliance) и XtrackC/PhenX-R® (in-Pheno). Метод состоит в амплификации генетической последовательности, кодирующей гли-копротеин наружной оболочки ВИЧ-1, выделенной из образцов плазмы пациентов для обра­зования либо способных, либо не способных к репликации рекомбинантных вирусов. Сейчас выпускается несколько улучшенных тест-систем. Например, первоначально одобренная к при­менению тест-система Trofile® была заменена улучшенной тест-системой Trofile-ES®. Эта тест-система способна обнаруживать меньшее количество Х4-тропных вирусов, резистентных к бло-каторам CCR5 рецепторов в случаях, когда они составляют небольшую долю в популяции, где преобладают CCR5-тропные штаммы. Потенциальная польза от применения новых, более чув­ствительных тест-систем была продемонстрирована в нескольких исследованиях (Saag, 2008; Su, 2008). Однако тест-системы для фенотипирования дорогостоящи и сложны в обращении. Для проведения теста необходима вирусная нагрузка не менее 500—1000 копий/мл. Кроме того, до получения результата проходит несколько недель. Поэтому существует необходимость в разработке методик, более простых для выполнения и требующих меньших затрат времени. Недавно была валидирована методика определения тро-

Заражение не произошлоЗаражение Рис. 6.2.2. Механизм действия аллостерического антагониста (блокатора) рецептора CCR5 маравирока (и викривирока). Связываясь с гидрофобным углублением, которое образуется между транс­мембранными спиралями рецептора CCR5 вблизи клеточной мембраны, он провоцирует ин­формационные изменения молекулы рецептора CCR5, в том числе участка присоединения gp120 ВИЧ-1. Связывание gp120 становится невозможным. R5A = антагонист (блокатор) ре­цептора CCR5 пизма методом генотипирования, более простая и экономичная (Sierra, 2007). В настоящее время исследования сосредоточены на изучении петли V3 гликопротеина наружной оболочки gp120, поскольку это участок связывания ВИЧ с корецептором (Jensen, 2003; Briz, 2006). Однако тропизм, по-видимому, определяется не только генетической последовательностью, кодирую­щей петлю V3, поскольку штаммы вируса с идентичными петлями V3 могут различаться по тро­пизму (Huang, 2006; Low, 2007). Тем не менее, согласно современным данным, методики опре­деления тропизма с помощью генотипирования, по-видимому, способны заменить более сложные и дорогостоящие методики определения тропизма с помощью фенотипирования. Се­годня в интернете есть несколько бесплатных систем для интерпретации результатов геноти-пирования, которые позволяют сделать прогноз в отношении тропизма вируса к корецептору путем анализа генетической последовательности, кодирующей участок V3: Эти системы для интерпретации составляют основу биоинформационных методов, опираю­щихся на базы данных с результатами фенотипирования и генотипирования штаммов, выде­ленных из образцов крови пациентов. Использование генотипирования дает возможность на­значать блокаторы рецепторов CCR5 многим пациентам с неприемлемыми побочными эффектами других антиретровирусных препаратов, но с хорошим вирусологическим ответом на АРТ — как упоминалось выше, для проведения фенотипирования необходима вирусная на­грузка не менее 1000 копий/мл, в то время как для проведения генотипирования, вероятно, до­статочно меньшего количества вирусных частиц в образце крови. В настоящее время ведется интенсивная работа по поиску методов определения тропизма по провирусной ДНК у пациен­тов с низкой (даже неопределимой) вирусной нагрузкой.