Методы клинико-лабораторного обследования больных

При поступлении больного с подозрением на изолированный или сочетанный ЭЛ проводилось комплексное клиническое обследование, включающее выяснение жалоб больного, сбор анамнеза болезни и анамнеза жизни, объективное обследование. Лабораторное обследование включало:

1)общий анализ крови;

2)группа крови и резус - фактор;

3)протромбиновый индекс, протромбиновое время, фибриноген, время рекальцификации, время свертываемости крови по Сухареву;

4)общий белок и его фракции, общий билирубин и его фракции, активность аланиновой трансферазы и аспартатаминотрансферазы, тимоловая проба, остаточный азот, мочевина, креатини;

5)реакция иммуноферментного анализа с использованием тест-системы «Эхинококкоз-^О-стрип» для выявления антител к антигенам эхинококка однокамерного.

6)общий анализ мочи.

Лабораторные исследования проводились согласно методикам, рекомендованным министерством здравоохранения Украины (Стандартные медицинские технологии, разработанные по поручению Президента Украины от 4.03.1998 года № 1 - 14/147 с целью унификации требований к объему и качеству медицинской помощи в лечебно-профилактических учреждениях Украины, утвержденные приказом № 226 от 27.07.1998 года).

Оценка данных лабораторных обследований в группе 65 больных с эхинококкозом легких (основная группа) проводилась в сравнении с контрольной группой, состоящей из 40 здоровых детей в возрасте от 4 до 16 лет, находящихся на обследовании в ОДКБ в период 2001 - 2004 годов.

Методика проведения реакции иммуноферментного анализа: в ходе твердофазного иммуноферментного анализа при взаимодействии исследуемых образцов сыворотки крови с иммобилизованными в лунках планшетов антигенами гельминта происходит связывание специфических антител и образование комплекса «антиген-антитело» на поверхности лунок. После

Удаления несвязавшихся компонентов сыворотки и добавления в лунки стрипов конъюгата антител против иммуноглобулинов человека с пероксидазой происходит включение ферментной метки в иммунный комплекс. В результате ферментативной реакции, проведенной в лунках с субстратным раствором для пероксидазы, содержащим перекись водорода и 5-аминосалициловую кислоту, образуется окрашенный продукт. Интенсивность окраски этого продукта пропорциональна концентрации антител к антигенам эхинококка однокамерного в анализируемом образце сыворотки.

Образец крови в количестве 1 мл отбирается из вены. Сыворотка крови тщательно отделяется от сгустков и примеси эритроцитов. Исследуемую сыворотку разводят раствором 2 в соотношении 1:100. При скрининге сывороток контрольные и исследуемые образцы используют в этом разведении. При тестировании проб сывороток в восьми последовательных двукратных разведениях их готовят для всех сывороток на растворе 2 в интервале 1:100 до 1:12800. В лунки стрипов, заполняя их до краев, вносят раствор 1, выдерживают 1-2 мин при температуре 20°С. При скрининге в лунки стрипов внести 100 мкл растворов контрольных образцов (положительный контрольный образец, отрицательный контрольный образец) в разведении 1:100. В остальные лунки стрипов внести по 100 мкл исследуемых образцов в разведении 1:100. При определении титра антител приготовить двухкратные разведения исследуемых и контрольных сывороток.

Содержимое лунок удалить в дезраствор, лунки промыть 3 раза раствором 1 и дважды дистиллированной водой, каждый раз добавляя в лунки не менее, чем по 250 мкл раствора, остатки влаги удалить постукиванием перевернутыми стрипами по фильтровальной бумаге.

Во все лунки добавить по 100 мкл рабочего раствора АСК, приготовленного непосредственно перед использованием. Планшет закрыть

Крышкой или фольгой и выдержать при периодическом встряхивании в защищенном от света месте при температуре 18-22° С 30-40 мин до развития темно-коричневого окрашивания субстратной смеси в лунках с положительным контрольным образцом.

Учет результатов проводят визуально или с помощью анализатора колориметрического иммуноферментного, регистрируя оптическую плотность в лунках стрипов при длине волны 492 нм.

Оценку результатов проводят только в том случае, если окраска субстратной смеси в лунках с положительным контрольным образцом имеет коричневый цвет, а в лунках с отрицательным контрольным образцом и без сыворотки бесцветная или слабо-розовая.

Сыворотку считают положительной, если значение ее оптической плотности в разведении 1:100 равно или превышает величину, определяемую по формуле:

ОП д = 2,02 • ОП К _ + 0,06 При определении титра антител в исследуемой сыворотке за титр ИФА к используемому антигену принимают то наибольшее разведение сыворотки при котором значении ее ОП превышает значение ОП д.

У всех больных выполнено электрокардиогрфическое исследование на аппарате «Siemens - К 230».

Ультразвуковое исследование выполнялось с применением аппарата «Siemens», работающего в реальном масштабе времени с использованием датчиков с частотой колебаний 3,5 МГц, 5 МГц и 7 МГц. При ультразвуковом исследовании легких и органов брюшной полости определялось количество, локализация, размеры эхинококковых кист. Обращалось внимание на форму кисты, четкость ее контуров, толщину капсулы, ее строение, наличие дочерних кист и других включений, эхогенный характер содержимого, наличие и объем свободной жидкости в брюшной и плевральной полостях. УЗИ органов брюшной полости и органов грудной клетки было проведено во всех случаях изолированного и сочетанного ЭЛ.

Рентгенография органов грудной клетки в переднезадней и боковой проекции (правой или левой) выполнялись на аппарате «Neo-Diagomax» у всех пациентов с изолированным и сочетанным ЭЛ. На рентгенограмме определялись число, локализация, размеры кист, их форма, четкость контуров кисты, наличие воздуха в кисте, наличие и выраженность воспалительного процесса в окружении кисты, высота стояния купола диафрагмы при

Поражении печени, наличие свободной жидкости и воздуха в плевральной полости.

Компьютерная томография органов грудной клетки (при поражении легких) или брюшной полости (при поражении печени) производилась на аппаратах «Somatom AR» и «Somatom CR». Показаниями к проведению компьютерной томографии были: множественный ЭЛ, подозрение на наличие эхинококковых кист легкого, размером до 5 см, не визуализирующихся четко на рентгенограмме органов грудной клетки, осложненное течение ЭЛ, подозрение на ЭЛ при длительно текущей пневмонии или плеврите, множественный ЭП. При проведении компьютерной томографии уточнялись количество, локализация, размеры кист, проводилась дифференциальная диагностика с другими заболеваниями легких и печени.

Для оценки показателей физического развития и наличия гипотрофии использовались таблицы непараметрического (центильного) типа. Если масса тела ребенка попадала в среднюю зону (25-75 центили), то она оценивалась как соответствующая средним характеристикам. Пределы от 25 до 10 центиля и от 75 до 90 свидетельствуют о тенденции понижения или повышения массы тела у детей. Зоны от 10 до 3 центиля и от 90 до 97 говорят о явном снижении или повышении веса, а еще более крайние значения массы тела являются свидетельством патологических состояний. Контрольную группу составили 40 детей в возрасте 4 - 16 лет, находившиеся на лечении по поводу грыж передней брюшной стенки.

Таблица 2.4. Применение различных методов обследования при изолированном и сочетанном эхинококкозе легких у детей