Чтобы оценить достоверность количественных результатов бактериоскопического исследования мазков мокроты, необходимо ответить на следующие вопросы:
1. Какова вероятность обнаружения кислотоустойчивых микобактерий (КУМ) в мазках, приготовленных из образцов мокроты с низкой, средней и высокой концентрацией этих бактерий?
2. Какова вероятность получения ложноположительных результатов при исследовании образцов мокроты, в действительности не содержащих туберкулезных микобактерий?
3. Какова частота совпадения результатов бактериологического исследования мазков, приготовленных из одних и тех же образцов мокроты, у разных специалистов или в различных лабораториях?
Частично ответ на первый вопрос приведен в табл. 1 главы 4 «Сколько туберкулезных микобактерий содержится в образце мокроты при положительных результатах микроскопии ее мазков?». Приведенные в этой таблице показатели получены из экспериментальных исследований и экстраполированы с предположением, что все бактерии равномерно распределены в образце мокроты. Однако, поскольку число бактерий в разных образцах мокроты различно, такие количественные исследования должны быть выполнены на большом количестве образцов. При этом в качестве контрольного критерия должны быть использованы результаты культурального исследования мокроты . В нескольких исследованиях [2, 3] Число бактериальных клеток, выявленных при бактериоскопии мазков, сравнивали с количеством колоний, полученных при посеве тех же образцов мокроты.
Результатами совместного исследования, проведенного одновременно в восьми лабораториях, было подтверждено, что количество колоний, обнаруживаемых при повторном исследовании одних и тех же образцов мокроты, варьируется в минимальной степени1. Тем не менее эти колебания не являются случайными, но имеют определенные границы. Различия же в результатах исследования разных образцов мокроты были обусловлены в основном разной концентрацией бактерий в этих образцах. Поэтому был сделан вывод о наличии прямой корреляции между количеством жизнеспособных бактерий в образце мокроты, количеством КУМ в мазках мокроты и вероятностью их обнаружения при бактериоскопическом исследовании мазков. Как и ожидалось, полученные результаты (табл. 2) показали, что вероятность выявления КУМ в мазках тем выше, чем больше этих микроорганизмов имеется в мокроте. При графическом изображении этих данных были получены кривые, показывающие 50% вероятность обнаружения КУМ в мазках при наличии около 6 000 микроорганизмов в 1 мл мокроты. Аналогичные результаты проводившихся исследований были опубликованы и ранее [2, 3].
А Источник: пункт 1 В списке литературы. Б Около 0,01 мл гомогенизированной мокроты помещали на предметное стекло и равномерно распределяли на поверхности площадью около 200 мм2. Площадь одного поля зрения при использовании объектива с иммерсией и при увеличении в 1 000 раз составляет около 0,02 мм2. Таким образом, один мазок состоит примерно из 10 000 таких полей зрения (см. главу 4 «Сколько туберкулезных микобактерий содержится в образце мокроты при положительных результатах микроскопии ее мазков?»). Чтобы проверить эти данные, Дэвид (David) и соавт. попытались определить вероятность получения отрицательного результата при бактериоскопическом исследовании образцов мокроты, содержащих различные количества туберкулезных бактерий. В трех независимых исследованиях был изучен 431 образец мокроты. Количество микроорганизмов варьировалось от 1500 до 300 000 в 1 мл мокроты. Каждый лабораторный работник должен был исследовать препараты из всех образцов мокроты, взятых у группы отобранных больных. Единообразие методики приготовления мазков и их изучения во всех лабораториях было обеспечено стандартным протоколом исследования. Работа была организована таким образом, что ни один участник не знал результатов, полученных в других лабораториях, или от кого был взят тот или иной материал, и не имел каких-либо других сведений, которые могли бы повлиять на конечные итоги исследования. Процент отрицательных результатов исследования мазков представлен в табл. 3. |
Таблица 2
Количество кислотоустойчивых микобактерий в мазках, концентрация растущих микобактерий в мокроте и вероятность получения положительного результата микобактериоскопического исследования3
Количество выявленных микобактерий |
Оценочная концентрация микобактерий в 1 мл мокроты |
Вероятность получения положительного результата |
0 в 100 полях зрения или |
|
|
Более6 |
||
1-2 в 300 полях зрения |
5 000-10 000 |
50% |
1-9 в 100 полях зрения |
Около 30 000 |
80% |
1-9 в 10 полях зрения |
Около 50 000 |
90% |
1-9 в каждом поле зрения |
Около 100 000 |
96,2% |
10 и более в каждом поле |
Около 500 000 |
99,95% |
Зрения |
Результаты, представленные в табл. 3 показывают, что вероятность получения ложноотрицательных результатов постоянно уменьшается с возрастанием концентриции микроорганизмов в исследуемом образце. Когда концентрация возбудителей туберкулеза превышает 100 000 в 1 мл мокроты, вероятность отрицательного результата бактериоскопического исследования приближается к нулю. Это подтверждает ранее известные данные о том, что если результаты изучения мазков стабильно положительны, где бы и кем бы они ни исследовались, то количество КУМ в 1 мл мокроты составляет 105-106 и более.
|
Воспроизведено с незначительными редакторскими изменениями из David HL et al. Sensitivity and specificity of acid-fast microscopy. Atlanta, GA, United States Department of Health, Education and Welfare, Centers for Disease Control (unpublished document prepared for the WHO Expert Committee on Tuberculosis, Geneva, 1973). |
Таблица 3 Вероятность получения отрицательного результата бактериоскопического исследования препаратов, приготовленных из образцов мокроты с различным количеством кислотоустойчивых микобактерий (по данным посева)3 |
Оценочная концентрация Номер эксперимента |
Однако использование культурального метода для оценки количества туберкулезных бактерий в мокроте имеет определенные ограничения; имеются существенные методические трудности, препятствующие получению точных результатов этим методом. Необходимо исследовать сравнительно большое число образцов; при этом нужно использовать специальную методику, чтобы свести к минимуму количество технических ошибок, неизбежных в тех случаях, когда значительная часть содержащихся в мокроте бактерий находится в виде скоплений: не представляется возможным определить, является ли каждая колония на поверхности питательной среды результатом размножения одной бактериальной клетки или скопления множества бактерий. С другой стороны, КУМ, обнаруживаемые при бактериоскопии, не всегда дают рост колоний при культуральном исследовании, например из-за их гибели или вследствие угнетенного метаболизма (см. главу 6 «Каковы основные причины ложноположительных и ложноотрицательных результатов бактероскопии мазков мокроты?»). Поэтому исследователи должны выбирать метод, который не зависит от результатов посева.
Так как целью исследования было определение достоверности (воспроизводимости результатов) метода бактериоскопического исследования мазков мокроты, проводили сравнение результатов, полученных несколькими профессиональными бактериологами, которые изучали мазки, приготовленные из одних и тех же образцов мокроты. Независимо от того, были ли ответы правильными или неправильными, определяли частоту совпадения или несовпадения результатов, полученных разными специалистами. Каждый специалист проводил независимое исследование мазков в соответствии со специальным протоколом. Все исследование было организовано следующим образом.
Изучение 54 образцов мокроты было проведено четырьмя бактериологами. Из каждого образца готовили по 4 мазка — по одному для каждого из специалистов, выполнявших независимые исследования. Результаты четырех анализов каждого образца мокроты оценивали по шкале, используя следующие обозначения: отрицательные результаты; скудное количество (1—9 КУМ в 100 полях зрения микроскопа) и положительные результаты + , 2+ и 3+). Результаты исследования каждого образца сравнивали по отдельности; результаты, полученные каждым специалистом, сравнивали с результатами остальных трех бактериологов во всех возможных сочетаниях. Таким образом, получали 12 результатов исследования каждого из образцов мокроты. Использование данного метода создавало возможность построить корреляционную таблицу (табл. 4), отражающую частоту совпадений и расхождений результатов, полученных четырьмя микроскопистами. Итоговое количество сравнительных результатов составило 648, из которых 4 результата не были зарегистрированы.
Результаты, представленные в табл. 4, показывают, что чаще всего совпадение результатов отмечалось при крайних оценках, т. е. при отрицательных ответах и при 3+ (все идентичные результаты располагаются в таблице по диагонали сверху вниз слева направо). Более того, из этой же таблицы видно, что если, по данным одного из специалистов, результат исследования был отрицательным или количество КУМ было незначительным, то другие специалисты дали заключение о положительном результате + , 2+ или 3+) только в 22 (7%) из 309 случаев. Другими словами, совпадение результатов было отмечено в 287 (93%) из 309 случаев. Аналогичным образом, если один специалист считал результаты анализа положительными, вероятность совпадения его результатов с ответами других специалистов составляла 93% (311 из 335 случаев).
Самая низкая частота совпадения результатов была отмечена в тех случаях, когда результаты исследования мазков мокроты расценивались как скудное число КУМ (см. табл. 4). Так, если один специалист выставлял подобную оценку, то несовпадение ответов других специалистов было отмечено в 36 (88%) случаях из 41. Отрицательные результаты микроскопии были отмечены другими специалистами в 24 (59%) случаях из 41. Эти данные соответствуют наблюдениям других специалистов, исследовавших мокроту больных с симптомами легочных заболеваний. Отрицательные результаты посева мокроты имели место у 3 из 4 таких больных, хотя в мазках мокроты у них находили 1—2 КУМ (HG ten
|
А Источник: David H. L. et al. Sensitivity and specificity of acid-fast microscopy. Atlanta, GA, United States Department of Health, Education and Welfare, Centers for Disease Control (unpublished document prepared for the WHO Expert Committee on Tuberculosis, Geneva, 1973). 6 Цифры в прямоугольнике указывают на частоту положительных ответов, данных всеми Специалистами (т. е. 1+, 2+, 3+). в Обнаружение 1-9 КУМ в 100 полях зрения микроскопа. |
Таблица 4 Частота совпадения или расхождения результатов, полученных четырьмя специалистамиа |
Dam, 1976, неопубликованные наблюдения). Бактериовыделение при данном классическом исследовании, выявившем методом бактериоскопии 1—2 КУМ в препарате, расценивалось как незначительное (или недостаточное). В подобных ситуациях следует повторять исследование мазков мокроты.
Что касается положительных результатов, то полученные данные показали уменьшение частоты совпадения результатов в тех случаях, когда оценка была ниже, чем 3+ (табл. 5). Согласно приведенным в таблице данным, совпадение результатов при оценках 1+ и 2+ отмечалось сравнительно редко — в 25 и 34% случаев (см. цифры по диагонали). Таким образом, возможность дифференцировать оценки 1+ и 2+ представляется весьма иллюзорной.
Описанный выше эксперимент подтвердил высокую достоверность (воспроизводимость) результатов, получаемых при бактериоскопическом исследовании мокроты. При независимом исследовании мазков, приготовленных из одних и тех же образцов мокроты, частота совпадения результатов, полученных специалистами равной квалификации, может достигать 93%. Однако такие хо
|
Таблица 5 Частота совпадения результатов, полученных каждым из четырех специалистов, с результатами других специалистов при наличии КУМ в мазках мокроты (данные из табл. 4 представлены в процентах) |
рошие результаты были получены в условиях эксперимента, в котором участвовали достаточно опытные лабораторные работники. В связи с этим возникает закономерный вопрос: «Насколько надежны результаты бактериоскопии, выполняемой в полевых условиях, особенно в периферийных медицинских учреждениях развивающихся стран?» Ответ на этот вопрос приведен ниже.
Оставить отзыв
Для отправки комментария вам необходимо авторизоваться.